AVALIAÇÃO DE VIABILIDADE DE CEPA DE BACILLUS SUBTILIS SOB CONSERVAÇÃO REFRIGERADA: ANÁLISE COMPARATIVA DE MÉTODOS DE PLAQUEAMENTO MICROBIANO

Authors

DOI:

https://doi.org/10.18623/rvd.v23.6226

Keywords:

Microbiologia, Microbiano, Metodologia, Bacillus

Abstract

A manutenção e avaliação da viabilidade de cepas microbianas são desafios centrais em microbiologia, especialmente sob armazenamento refrigerado. Este trabalho teve como objetivo comparar a eficiência dos métodos Spread Plate e Streak Plate na quantificação viável de Bacillus subtilis após armazenamento a 4 ºC. Foram realizadas diluições seriadas, aplicadas em ambos os métodos, com análise quantitativa da formação de colônias e observação microscópica após coloração de Gram. O Spread Plate proporcionou resultados mais precisos e reprodutíveis na contagem de unidades formadoras de colônia, enquanto o Streak Plate apresentou limitações quantitativas, menor sensibilidade e distribuição menos uniforme do inóculo. A coloração de Gram indicou coloração roxa‑rosada, sugerindo bactéria gram‑negativa, porém a presença de esporulação e endósporos esverdeados pode indicar gram‑variabilidade devido a estresse térmico. A regressão linear entre os log10 das contagens obtidas revelou R² = 0,89, demonstrando correlação positiva significativa (p < 0,05) entre os métodos. Entretanto, o teste de Wilcoxon mostrou diferença significativa (p < 0,05), indicando que o Streak Plate subestima sistematicamente as unidades viáveis em relação ao Spread Plate, confirmando sua menor eficácia para análises quantitativas.

References

AKINSEMOLU, Adenike A. et al. Exploring Bacillus subtilis : Ecology, biotechnological applications, and future prospects. Journal of Basic Microbiology, v. 64, n. 6, 20 jun. 2024.

ALVES, Kessia Caroline Souza et al. Bacillus subtilis: uma versátil ferramenta biotecnológica. Scientia Amazonia, v. 7, n. 2, p. 15–23, 2018.

AMORIM, Carolina Ferreira; OLIVEIRA, Ana Carolina Santana de; COSTA, Emanuela Avelar Silva. Construção de bacterioteca em instituição de ensino superior para fins didáticos e de pesquisa. Research, Society and Development, 16 ago. 2020.

BEVERIDGE, T. J. Mechanism of gram variability in select bacteria. Journal of Bacteriology, v. 172, n. 3, p. 1609–1620, mar. 1990.

BEVERIDGE, TJ. Use of the Gram stain in microbiology. Biotechnic & Histochemistry, v. 76, n. 3, p. 111–118, 12 jan. 2001.

CAO, Xiongjing et al. Comparing the Effects of Two Culture Methods to Determine the Total Heterotrophic Bacterial Colony Count in Hospital Purified Water. Journal of Epidemiology and Global Health, v. 14, n. 1, p. 184–192, 15 fev. 2024.

CARRETA, Jorge Augusto. O micróbio é o inimigo” : debates sobre a microbiologia no Brasil (1885-1904). Campinas, SP: Universidade Estadual de Campinas, 2006.

CHECINSKA, Aleksandra; PASZCZYNSKI, Andrzej; BURBANK, Malcolm. Bacillus and Other Spore-Forming Genera: Variations in Responses and Mechanisms for Survival. Annual Review of Food Science and Technology, v. 6, n. 1, p. 351–369, 10 abr. 2015.

COICO, Richard. Gram Staining. Current Protocols in Immunology, v. 23, n. 1, set. 1997.

COSTA, Renata Garcia; ESTEVES, Wagner Thadeu Cardoso; NOGUEIRA, Joseli Maria da Rocha. Principais métodos clássicos de coloração em bacteriologia: aplicações, técnicas, fundamentos e limitações. Revista Brasileira de Análises Clínicas, v. 56, n. 3, p. 183–196, 2024.

COTA, Ana Lídia Soares; ALVIM, Ronaldo Gomes. Effect of storage temperature on Streptococcus mutans viability. Revista de Odontologia da UNESP, v. 47, n. 2, p. 74–78, 23 abr. 2018.

DE OLIVEIRA, Valéria Maia; SETTE, Lara Durães; FANTINATTI-GARBOGGINI, Fabiana. Preservação e prospecção de recursos microbianos. 2006.

GREEN, Lorrence H. Culturing and preserving microorganisms. In: Practical Handbook of Microbiology. CRC Press, 2021. p. 37–40.

HELLANY, Heba et al. Isolation and Characterization of Bacillus Subtilis BSP1 from Soil: Antimicrobial Activity and Optimization of Fermentation Conditions. Processes, v. 12, n. 8, p. 1621, 2 ago. 2024.

HUGENHOLTZ, Philip; GOEBEL, Brett M.; PACE, Norman R. Impact of Culture-Independent Studies on the Emerging Phylogenetic View of Bacterial Diversity. Journal of Bacteriology, v. 180, n. 18, p. 4765–4774, 15 set. 1998.

KATZ, D. Sue. The streak plate protocol. Microbe Library, p. 1–14, 2008.

KIM, Junehyung; SCHUMANN, Wolfgang. Display of proteins on Bacillus subtilis endospores. Cellular and Molecular Life Sciences, v. 66, n. 19, p. 3127–3136, 25 out. 2009.

LEMOS, Michelle Andrade; GHISLENI, Daniela Dal Molim; DE JESUS ANDREOLI PINTO, Terezinha. Validation of Alternative Microbiological Method in Non-sterile Pharmaceutical Product Through the Reference Strains and Productive Environment Bioburden. Journal of Pharmaceutical Innovation, v. 15, n. 4, p. 641–650, 6 dez. 2020.

LU, Zhenxiang; GUO, Weina; LIU, Chang. Isolation, identification and characterization of novel Bacillus subtilis; Journal of Veterinary Medical Science, v. 80, n. 3, p. 427–433, 2018.

LUO, X. Z. et al. Physical and chemical properties and antimicrobial spectrum of subtilin from Bacillus subtilis FB123. J. Microbiol, v. 28, p. 64–67, 2008.

MENDES, Janaina dos Santos. Análise microbiológica de coliformes em água de torneira em praça pública, Santarém/PA. In: III COBICET, 29 ago. 2022.

MING, H.; LINA, D. O. U.; QING, TIAN. Advances in application research of Bacillus subtilis. J Anhui Agric Sci, v. 36, p. 11622–11623, 2008.

MONNERAT, Rose et al. Manual de produção e controle de qualidade de produtos biológicos à base de bactérias do gênero Bacillus para uso na agricultura. Brasília, DF: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2020. Documento 369. Disponível em: http://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/infoteca/handle/doc/1122563

NICHOLSON, W. L. Roles of Bacillus endospores in the environment. Cellular and Molecular Life Sciences CMLS, v. 59, n. 3, p. 410–416, mar. 2002.

NICHOLSON, Wayne L. et al. Bacterial endospores and their significance in stress resistance. Antonie van Leeuwenhoek, v. 81, n. 1–4, p. 27–32, dez. 2002.

NICHOLSON, Wayne L. et al. Resistance of Bacillus Endospores to Extreme Terrestrial and Extraterrestrial Environments. Microbiology and Molecular Biology Reviews, v. 64, n. 3, p. 548–572, set. 2000.

OGODO, Alloysius Chibuike et al. Microbial techniques and methods: basic techniques and microscopy. In: Analytical Techniques in Biosciences. Elsevier, 2022. p. 201–220.

OKEREKE, H. C.; KANU, I. J. Cultural methods. Laboratory Guide for Microbiology, p. 54–69, 2004.

OWUAMA, C. I. Microbiology laboratory manual. Micro Trend Digital Press–Nig. Ltd. Yola, Nigeria, 2015.

PARAY, Ansar Ahmad; SINGH, Manju; AMIN MIR, Mohsin. Gram Staining: A Brief Review. International Journal of Research and Review, v. 10, n. 9, p. 336–341, 22 set. 2023.

PRICE, Chester W. General Stress Response in Bacillus subtilis and Related Gram-Positive Bacteria. In: Bacterial Stress Responses. Washington, DC, USA: ASM Press, 2014. p. 301–318.

REASONER, Donald J. Heterotrophic plate count methodology in the United States. International Journal of Food Microbiology, v. 92, n. 3, p. 307–315, maio 2004.

RIEDEL, Stefan et al. Microbiologia Médica de Jawetz, Melnick & Adelberg-28. 28. ed. Porto Alegre: AMGH, 2022.

SÁ, Magali Romero; SILVA, Manuela Da. Coleções vivas: as coleções microbiológicas da Fundação Oswaldo Cruz. Museologia & Interdisciplinaridade, v. 5, n. 9, p. 175–187, 30 abr. 2017.

SALFINGER, Yvonne; TORTORELLO, Mary Lou. Compendium of methods for the microbiological examination of foods. American Public Health Association, 2015.

SANDERS, Erin R. Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods. Journal of Visualized Experiments, n. 63, 11 maio 2012.

SARTORI, Maristela Aparecida. A microbiologia no âmbito das ciências ambientais: segundo o livro didático e os documentos norteadores do componente curricular biologia do ensino médio no estado do Paraná. 2023. Disponível em: https://tede.unioeste.br/handle/tede/6764

SETLOW, Peter. Germination of Spores of Bacillus Species: What We Know and Do Not Know. Journal of Bacteriology, v. 196, n. 7, p. 1297–1305, abr. 2014.

SILVA, Daniel Queiroz Hese da; SÁ, Lauro Chagas e; De Farias, Carine Coneglian. Experiência interdisciplinar com metodologias ativas envolvendo matemática e microbiologia no curso superior de biomedicina. Revista Eletrônica Sala de Aula em Foco, v. 12, n. 1, p. 6–22, 23 out. 2023.

SILVA, Marcelo Teixeira et al. Bacillus subtilis como recurso biotecnológico para produção de enzimas e suas aplicações: uma revisão. OBSERVATÓRIO DE LA ECONOMÍA LATINOAMERICANA, v. 22, n. 7, p. e5628, 3 jul. 2024.

SIMIONE, Frank P. Cryopreservation: storage and documentation systems. In: Biotechnology. CRC Press, 2020. p. 7–31.

SIMIONE, Frank P.; CYPESS, Raymond H. Managing a Global Biological Resource of Cells and Cellular Derivatives. In: Management of Chemical and Biological Samples for Screening Applications. Wiley, 2012. p. 143–164.

SIMIONE, Frank; SHARP, Tim. Best practices for storing and shipping cryopreserved cells. In: Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal, v. 53, n. 10, p. 888–895, 13 dez. 2017.

SOLA, Marília Cristina et al. MANUTENÇÃO DE MICRORGANISMOS: CONSERVAÇÃO E VIABILIDADE. Enciclopédia Biosfera, v. 8, n. 14, p. 1398–1418, 2012.

STÜLKE, Jörg et al. Bacillus subtilis, a Swiss Army Knife in Science and Biotechnology. Journal of Bacteriology, v. 205, n. 5, 25 maio 2023.

SUTTON, Scott. The limitations of CFU: compliance to CGMP requires good science. Journal of GXP Compliance, v. 16, n. 1, p. 74, 2012.

SWARGE, Bhagyashree et al. Investigating Synthesis of the MalS Malic Enzyme during Bacillus subtilis Spore Germination and Outgrowth and the Influence of Spore Maturation and Sporulation Conditions. mSphere, v. 5, n. 4, 26 ago. 2020.

TAYLOR, Raymond H.; ALLEN, Martin J.; GELDREICH, Edwin E. Standard plate count: A comparison of pour plate and spread plate methods. Journal AWWA, v. 75, n. 1, p. 35–37, jan. 1983.

TRIPATHI, Nishant; SAPRA, Amit. Gram staining. 2020.

UGBOGU, O. C. Measurements and dilutions. Laboratory Guide for Microbiology, Azu Onyeagba (Ed.), Crystal Publishers, Okigwe, Imo State-Nigeria, p. 30–33, 2004.

WILLEY, Joanne M.; SHERWOOD, Linda; WOOLVERTON. Christopher J. Prescott’s microbiology. McGraw-Hill New York, 2011. v. 7

ZIPKES, Marilyn R.; GILCHRIST, James E.; PEELER, James T. Comparison of Yeast and Mold Counts by Spiral, Pour, and Streak Plate Methods. Journal of AOAC INTERNATIONAL, v. 64, n. 6, p. 1465–1469, 1 nov. 1981.

Published

2026-05-22

How to Cite

Jesus, D. B. C. da S. de, Araujo, A. T. de, Werneck, P. R., Ogava, L. E., Feiden, A., & Signor, A. (2026). AVALIAÇÃO DE VIABILIDADE DE CEPA DE BACILLUS SUBTILIS SOB CONSERVAÇÃO REFRIGERADA: ANÁLISE COMPARATIVA DE MÉTODOS DE PLAQUEAMENTO MICROBIANO. Veredas Do Direito, 23(8), e236226. https://doi.org/10.18623/rvd.v23.6226